Citometría de Flujo

Citometría de Flujo

  1. Presentación
  2. Técnicas
  3. Equipamiento
  4. Normas de uso
  5. Tarifas
Citometría de Flujo

El Servicio de Citometría de Flujo es una unidad especializada en identificar, cuantificar y aislar subpoblaciones definidas de células, en función de los niveles de expresión de marcadores fluorescentes y su relación entre sí a nivel de una sola célula.

Cualquier parte de una célula o cualquier función de una célula que pueda ser marcada por un fluorocromo puede medirse mediante citometría de flujo, lo que la convierte en una técnica esencial en muchas aplicaciones biológicas y biomédicas. 

Esta unidad tiene como objetivo proporcionar a los investigadores del IBiS asesoramiento técnico y científico en el uso de tecnologías de análisis y aislamiento en citometría, colaborando con ellos en el diseño, adquisición, análisis e interpretación de datos de citometría de flujo.

Ubicación:1ª planta del IBiS, junto a la puerta de salida a cafetería. El Servicio de Citometría tiene tres salas: Sala 1. Citometría analítica. Sala 2. Separación celular animales de laboratorio. Sala 3. Separación celular muestras humanas.

Horario:L-J: 8:30-18:00, V: 8:30-15:00

(*) Aquellos experimentos que requieran tiempo fuera del horario establecido se podrán realizar previo conocimiento del técnico responsable.

APLICACIONES 

•Análisis multiparamétricos de marcajes tanto extra como intracelulares para inmunofenotipaje celular y funcionalidad.
•Análisis de expresión génica mediante genes reporteros.
•Medida de la proliferación celular: CFDA, BrdU, CFSE, etc.
•Ciclo celular: ciclinas, contenido DNA.
•Ensayos de apoptosis (integridad de la membrana plasmática, función mitocondrial, actividad caspasa, fragmentación del ADN, etc.)
•Secreción de citoquinas mediante ensayo multiplex.
•FRET.
•Separación de subpoblaciones celulares basada en la expresión diferencial de distintos marcadores intra y extracelulares.

APLICACIONES EN CURSO

•Localización de proteínas mediante metodología PulsA.
•Desarrollo y optimización de nuevas aplicaciones de separación celular por cell sorting:
oSeparación de partículas grandes, como clusters de levaduras o pequeñas larvas de C.Elegans.
oSeparación de partículas pequeñas: por debajo de 1um en función de sus características fenotípicas.
•Análisis de nuevas técnicas computacionales, como la reducción de la dimensionalidad y los algoritmos de agrupamiento, que sirven para la interpretación de los datos masivos de citometría.

ASISTENCIA TÉCNICA

•Curso de manejo de equipos a nuevos usuarios.
•Supervisión y mantenimiento general de los analizadores.
•Asistencia a los usuarios en los problemas con los equipos, ya sean de índole técnica o experimental.
•Asistencia sobre metodología y diseño experimental.
Pulse sobre los distintos equipos para conocer en detalle sus características.
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Citómetro analizador Canto II (Becton Dickinson) [Sala 1]

 

  • Tres Láseres:
    • Violeta. 405 nm 30mW. Dos detectores.
    • Azul: 488nm 20mW. Cinco detectores (más FSC).
    • Rojo: 640 nm 17 mW. Dos detectores
  • Módulo de adquisición en placa HTS (96p, 384p). 
  • Para ciclo celular y marcajes multiparamétricos de hasta 8 fluoróforos.

 

PARA VER LA CONFIGURACIÓN ÓPTICA DE ESTE EQUIPO, POR FAVOR, CONSULTE LA NORMATIVA.

Citómetro analizador Canto II (Becton Dickinson) [Sala 1]
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Citómetro Analizador CytoFlex S (Beckman Coulter) [Sala 1]

  • Cuatro láseres.
    • Violeta. 405 nm 80mW. Cuatro detectores.
    • Azul: 488nm 50mW. Tres detectores (más FSC).
    • Verde: 561nm 35mW. Cuatro detectores.
    • Rojo: 638 nm 50 mW. Tres detectores.
  • Módulo de placas.
  • Detectores de APD.
  • Detector de SSC en el láser violeta (micropartículas).
Citómetro Analizador CytoFlex S (Beckman Coulter) [Sala 1]
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Citómetro analizador LRS II Fortessa (Becton Dickinson) [Sala 1]

 

  • Cuatro Láseres:
    • Violeta: 405 nm 50mW. Siete detectores.
    • Azul: 488nm 50mW. Tres detectores (más FSC).
    • Rojo: 640 nm 40 mW. Tres detectores.
    • Verde: 561nm 50mW. Cinco detectores.
  • Módulo de toma de muestras automatizada HTS.
  • Para marcajes multiparamétricos de hasta 15 fluoróforos.

 

PARA VER LA CONFIGURACIÓN ÓPTICA DE ESTE EQUIPO, POR FAVOR, CONSULTE LA NORMATIVA.

Citómetro analizador LRS II Fortessa (Becton Dickinson) [Sala 1]
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Citómetro Analizador Spectral Aurora (Beckman Coulter) [Sala 1]

  • Cuatro láseres. Arrays de detectores.
    • Violeta: 405 nm 100mW. 16 APDs.
    • Azul: 488nm 50mW. 14APDs.
    • Verde: 561nm 50mW. 10 APDs.
    • Rojo: 640 nm 80 mW. 8 APDs.
  • Posibilidad de detección SSC en Violeta.
  • Análisis multiparamétricos de más de 15 fluoróforos.
Citómetro Analizador Spectral Aurora (Beckman Coulter) [Sala 1]
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Separador celular BD FacsJazz (Becton Dickinson) [Sala 2]

 

  • Jet-in-air con boquilla de 100um.
  • Configuración óptica (Anexo II):
    • Láser Azul (488nm, 80mW).  3 detectores (más FSC).
    • Láser Verde (561nm, 50mW). 4 detectores.
  • Sistema de Index sorting, que permite localizar las células separadas dentro del análisis, mejorando así las separaciones posteriores (disponible en separación en placa).

 

PARA VER LA CONFIGURACIÓN ÓPTICA DE ESTE EQUIPO, POR FAVOR, CONSULTE LA NORMATIVA.

Separador celular BD FacsJazz (Becton Dickinson) [Sala 2]
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Separador celular Facs Aria Fusion (Becton Dickinson) [Sala 3]

  • Configuración óptica (Anexo II).
    • Láser Ultravioleta. 355nm, 15mW. Dos detectores colineales con el láser violeta.
    • Láser Violeta. 405nm, 85mW.  6 detectores.
    • Láser Azul: 488nm, 50mW. Tres detectores (más FSC).
    • Láser Rojo: 633 nm; 100 mW. Tres detectores.
    • Láser Verde. 561 nm, 50mW.  Cinco detectores.
  • Admite varios soportes tanto para la toma de muestra como para la recogida (portaobjetos, placas multipocillos, etc.)
  • Sistema de control de temperatura para la adquisición y recogida de muestras.
  • Separación multiparamétrica de hasta cuatro poblaciones simultáneamente.
  • Campana de flujo laminar de Clase II para separaciones en esterilidad.
  • Sistema de Index sorting, que permite localizar las células separadas dentro del análisis, mejorando así las separaciones posteriores (disponible en separación en placa).

 

PARA VER LA CONFIGURACIÓN ÓPTICA DE ESTE EQUIPO, POR FAVOR, CONSULTE LA NORMATIVA.

Separador celular Facs Aria Fusion (Becton Dickinson) [Sala 3]
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Separador celular MoFlo Astrios (Beckman Coulter) [Sala 2]

  • Configuración óptica (Anexo II).
    • Láser Violeta. 405nm, 85mW.  6 detectores.
    • Láser Azul: 488nm, 50mW. Seis detectores (más SSC, y dos detectores para FSC).
    • Láser Rojo: 633 nm; 100 mW. Tres detectores.
    • Láser Verde. 561 nm, 50mW.  Cinco detectores.
  • Admite varios soportes tanto para la toma de muestra como para la recogida (portaobjetos, placas multipocillos, etc.)
  • Sistema de control de temperatura para la adquisición y recogida de muestras.
  • Separación multiparamétrica de hasta SEIS poblaciones simultáneamente.
  • Campana de flujo laminar de Clase II para separaciones en esterilidad.
  • Sistema de recogida de waste, para no perder ni una célula.
Separador celular MoFlo Astrios (Beckman Coulter) [Sala 2]
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Separador de partículas grandes Biosorter (Union Biometrica) [Sala 3]

  • Configuración óptica (Anexo II).
    • Láser Azul: 488nm, 50mW. Tres PMT´s, además de extinction detector (PIN), axial lenght (TOF) y optical density (EXT).
  • Admite varios soportes para la recogida: tubos cónicos de 50mL, vasos de 750mL, 1.5L, etc. 
Separador de partículas grandes Biosorter (Union Biometrica) [Sala 3]
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Separador magnético automático AutoMACS ProSeparator (Miltenyi Biotec) [Sala 1]

 

  • Dos columnas ferromagnéticas.
  • Distintos soportes para la toma y recogida de muestras.
Separador magnético automático AutoMACS ProSeparator (Miltenyi Biotec) [Sala 1]

NORMATIVA Con Carácter General

EL SISTEMA DE RESERVAS

•Para acceder entra en la Plataformas de Reservas online: https://servicios.ibis-sevilla.es/ .  Sigue las instrucciones para registrarte.
•Para reservar a un miembro del equipo para recibir el curso de manejo de un equipo o simplemente para ayudarte, selecciona el botón de “SOLICITAR TÉCNICO” que aparece en la ventana de reservas al seleccionar el equipo deseado. Todos los usuarios nuevos tendrán esta opción seleccionada por defecto.
•Antes de reservar asistencia técnica o un separador celular, comprueba que el personal está libre ya que ellos son los únicos responsables de manejar los separadores y eso puede llevar un tiempo. Si estamos  ayudando a alguien ese día aparecerá una “T” en la esquina superior derecha de la reserva del equipo.

Ejemplo: el Astrios parece libre para el jueves, ¿por qué la plataforma no me deja reservarlo? Cuando miras a todos los equipos verás que el personal del servicio está ocupado con otras reservas que requieren asistencia técnica “T”!

•De forma general, las reservas se harán con un máximo de una semana de antelación y con un mínimo de una hora.

RESERVAS DE ANALIZADORES

Training

•Los cursos de manejo de los analizadores son proporcionados para permitir que los usuarios manejen los equipos de manera independiente.

 

•Los analizadores disponibles para su uso, BD Fortessa, BD Canto, BC CytoFlex & Cytek Aurora son muy diferentes entre ellos. Podemos aconsejar cuál de ellos es mejor para las necesidades de cada usuario.

 

•La primera sesión del curso de manejo durará 1 hora (asumiendo no experiencia previa). Sólo necesitas traer papel y boli..¡no muestras! En la segunda sesión puedes traer muestras y te podemos ayudar con el setup de tu experimento con tus células.

 

•Cuando estamos seguros que puedes usar el equipo de forma independiente, se te autorizará en la plataforma para reservar ese equipo sin necesidad de asistencia técnica.

DO´s

•Si llegas tarde a tu reserva, trata de no retrasar al próximo usuario de ese instrumento.
•Puedes reservar otro hueco libre en vez de retrasar a algún usuario.
•Recuerda que los cambios y cancelaciones en las reservas para el mismo día no serán aceptadas cuando  ello implique un gasto innecesario en el servicio.
Pregunta al personal del servicio por una de las licencias de software disponibles: DIVA 8.0, FlowJo v.10.2 o Kaluza 2.1

RESERVAS DE SEPARADORES CELULARES

•Ven al laboratorio o escríbenos a citometría-ibis@us.es con tus requerimientos para el sorter.
•Necesitamos saber los siguientes detalles sobre tus muestras/necesidades de sorting:
•Qué tipo de células traerás: cantidad, tamaño, viabilidad, riesgo biológico.
•Fluorocromos que vas a usar incluyendo el marcaje de viabilidad.
•Número de poblaciones para separar, cuántas células necesitas recuperar y el nivel de pureza que necesitas.
•Una vez conocido esto, decidiremos qué instrumento es el apropiado para tu experimento y haremos la reserva por ti. Futuros sorters pueden ser reservados por el usuario si todo va bien.
•Los separadores celulares disponibles son Astrios (Beckman Coulter), Fusion (BD), Jazz (BD), Biosorter (Union Biometrica) y AutoMACS. Para más detalles sobre los separadores celulares, visita la pestaña de Equipamiento.
•El uso, mantenimiento y limpieza de los separadores celulares es responsabilidad del personal del servicio.
•

DO´s

•Léete esta guía sobre cómo preparar tus células antes de venir al laboratorio de Citometría. (enlace al documento).
•Por favor, sé puntual. Los separadores celulares pueden procesar entre 10-20 millones de células por hora (dependiendo de la muestra). Cuanto más tarde llegues, menos tiempo habrá para terminar tu sorter antes del próximo usuario o del final de la jornada.
•Reserva suficiente tiempo para tu sorting. Si después termina más temprano, lo tendremos en cuenta para la facturación.
•Pon todo el detalle que puedas sobre el sorting en el lugar facilitado para ello en la plataforma de reservas, para facilitarnos el setup del intrumento. Ej: número de células, poblaciones a separar, tipo de tubos de recogida, florocromos/marcadores a usar, objetivo final del sorting (cultivo, extracción RNA, DNA o proteínas, …),  etc.

ADMINISTRACIÓN DATOS

•Para analizar los datos obtenidos en el servicio disponemos de varias licencias de software:
•8 licencias DIVA 8.0  (válidas sólo para datos obtenidos en instrumentos de BD)
•8 licencias FlowJo v.10.2 (válidas para todo tipo de datos)
•5 licencias online Kaluza 2.1 (válidas para todo tipo de datos)
•El préstamo de las licencias es por un tiempo limitado. Por favor, devuelve la licencia cuando hayas terminado.
•Los datos acumulados en el software de adquisición puede provocar un mal funcionamiento del mismo. Por ello, cada vez que se generen datos nuevos deben exportarse al servidor. No obstante, el personal del servicio hará limpieza general de los equipos locales dos veces al año.
•Los datos en el servidor se limpiarán 1 vez al año.

 

DO´s

•Si no estás usando una licencia, por favor, devuélvela.
•Exporta tus datos al servidor y borra datos antiguos de los equipos locales. Estarás ayudando a un mejor funcionamiento del software de adquisición.
•Recuerda que la finalidad del servidor es la transferencia de datos. No debe usarse como lugar de almacenamiento permanente. Transfiere tus datos y bórralos, así ayudarás a tener un rendimiento adecuado.

A continuación puede descargar las tarifas aplicables.

Para solicitar información al respecto puede dirigirse a la siguiente dirección de correo electrónico: majocastro@us.es.