Citometría de Flujo y Separación Celular

Citometría de Flujo y Separación Celular

  1. Presentación
  2. Técnicas
  3. Equipamiento
  4. Normas de uso
  5. Tarifas
Citometría de Flujo y Separación Celular

El Servicio de Citometría de Flujo y Separación Celular es una unidad especializada en técnicas de análisis celular y tiene como objetivo proveer a los investigadores del IBiS de la última tecnología en citometría de flujo, que sirva de soporte para continuar la investigación biomédica que se lleva a cabo.

Ubicación:1ª planta

Horario:L-V: De 9:00 a 17:00 *

(*) Aquellos experimentos que requieran tiempo fuera del horario establecido se podrán realizar previo conocimiento del técnico responsable.

Las técnicas que ofrece este servicio son muy numerosas. El uso más común es analizar los diferentes fenotipos celulares presentes en una población compleja usando como criterio de distinción la expresión diferencial de proteínas.

Entre las opciones que se ofrecen destacamos algunas:

  • Inmunofenotipaje celular.
  • Análisis de ciclo celular, proliferación y apoptosis.
  • Separación de poblaciones celulares mediante citometría de flujo (cell sorting).
  • Análisis multiplexado.
  • Análisis de micropartículas.
  • Análisis SP.
  • Análisis de ROS.
  • Cinéticas.
  • Desarrollo de nuevas técnicas en citometría de flujo para la medición de otros parámetros, como nucleares, citoplasmáticos, de superficie y extracelulares.
Pulse sobre los distintos equipos para conocer en detalle sus características.

Se hace distinción entre los aparatos utilizados por los usuarios y aquellos que sólo serán manejados por el técnico del servicio, tanto para la reserva como para su uso. 

Los de acceso libre se encuentran en la primera sala del servicio (sala 1, citometría analítica) y los de uso restringido en las salas contiguas (sala 2, separación celular animales laboratorio; sala 3, separación celular muestras humanas).

Citómetro analizador Canto II (Becton Dickinson) [Sala 1]

 

  • Tres Láseres:
    • Violeta. 405 nm 30mW. Dos detectores.
    • Azul: 488nm 20mW. Cinco detectores (más FSC).
    • Rojo: 640 nm 17 mW. Dos detectores
  • Módulo de adquisición en placa HTS (96p, 384p). 
  • Para ciclo celular y marcajes multiparamétricos de hasta 8 fluoróforos.

 

PARA VER LA CONFIGURACIÓN ÓPTICA DE ESTE EQUIPO, POR FAVOR, CONSULTE LA NORMATIVA.

Citómetro Analizador CytoFlex S (Beckman Coulter) [Sala 1]

  • Cuatro láseres.
    • Violeta. 405 nm 80mW. Cuatro detectores.
    • Azul: 488nm 50mW. Tres detectores (más FSC).
    • Verde: 561nm 35mW. Cuatro detectores.
    • Rojo: 638 nm 50 mW. Tres detectores.
  • Módulo de placas.
  • Detectores de APD.
  • Detector de SSC en el láser violeta (micropartículas).

Citómetro analizador LRS II Fortessa (Becton Dickinson) [Sala 1]

 

  • Cuatro Láseres:
    • Violeta: 405 nm 50mW. Siete detectores.
    • Azul: 488nm 50mW. Tres detectores (más FSC).
    • Rojo: 640 nm 40 mW. Tres detectores.
    • Verde: 561nm 50mW. Cinco detectores.
  • Módulo de toma de muestras automatizada HTS.
  • Para marcajes multiparamétricos de hasta 15 fluoróforos.

 

PARA VER LA CONFIGURACIÓN ÓPTICA DE ESTE EQUIPO, POR FAVOR, CONSULTE LA NORMATIVA.

Citómetro Analizador Spectral Aurora (Beckman Coulter) [Sala 1]

  • Cuatro láseres. Arrays de detectores.
    • Violeta: 405 nm 100mW. 16 APDs.
    • Azul: 488nm 50mW. 14APDs.
    • Verde: 561nm 50mW. 10 APDs.
    • Rojo: 640 nm 80 mW. 8 APDs.
  • Posibilidad de detección SSC en Violeta.
  • Análisis multiparamétricos de más de 15 fluoróforos.

Separador celular BD FacsJazz (Becton Dickinson) [Sala 2]

 

  • Jet-in-air con boquilla de 100um.
  • Configuración óptica (Anexo II):
    • Láser Azul (488nm, 80mW).  3 detectores (más FSC).
    • Láser Verde (561nm, 50mW). 4 detectores.
  • Sistema de Index sorting, que permite localizar las células separadas dentro del análisis, mejorando así las separaciones posteriores (disponible en separación en placa).

 

PARA VER LA CONFIGURACIÓN ÓPTICA DE ESTE EQUIPO, POR FAVOR, CONSULTE LA NORMATIVA.

Separador celular Facs Aria Fusion (Becton Dickinson) [Sala 3]

  • Configuración óptica (Anexo II).
    • Láser Ultravioleta. 355nm, 15mW. Dos detectores colineales con el láser violeta.
    • Láser Violeta. 405nm, 85mW.  6 detectores.
    • Láser Azul: 488nm, 50mW. Tres detectores (más FSC).
    • Láser Rojo: 633 nm; 100 mW. Tres detectores.
    • Láser Verde. 561 nm, 50mW.  Cinco detectores.
  • Admite varios soportes tanto para la toma de muestra como para la recogida (portaobjetos, placas multipocillos, etc.)
  • Sistema de control de temperatura para la adquisición y recogida de muestras.
  • Separación multiparamétrica de hasta cuatro poblaciones simultáneamente.
  • Campana de flujo laminar de Clase II para separaciones en esterilidad.
  • Sistema de Index sorting, que permite localizar las células separadas dentro del análisis, mejorando así las separaciones posteriores (disponible en separación en placa).

 

PARA VER LA CONFIGURACIÓN ÓPTICA DE ESTE EQUIPO, POR FAVOR, CONSULTE LA NORMATIVA.

Separador celular MoFlo Astrios (Beckman Coulter) [Sala 2]

  • Configuración óptica (Anexo II).
    • Láser Violeta. 405nm, 85mW.  6 detectores.
    • Láser Azul: 488nm, 50mW. Seis detectores (más SSC, y dos detectores para FSC).
    • Láser Rojo: 633 nm; 100 mW. Tres detectores.
    • Láser Verde. 561 nm, 50mW.  Cinco detectores.
  • Admite varios soportes tanto para la toma de muestra como para la recogida (portaobjetos, placas multipocillos, etc.)
  • Sistema de control de temperatura para la adquisición y recogida de muestras.
  • Separación multiparamétrica de hasta SEIS poblaciones simultáneamente.
  • Campana de flujo laminar de Clase II para separaciones en esterilidad.
  • Sistema de recogida de waste, para no perder ni una célula.

Separador de partículas grandes Biosorter (Union Biometrica) [Sala 3]

  • Configuración óptica (Anexo II).
    • Láser Azul: 488nm, 50mW. Tres PMT´s, además de extinction detector (PIN), axial lenght (TOF) y optical density (EXT).
  • Admite varios soportes para la recogida: tubos cónicos de 50mL, vasos de 750mL, 1.5L, etc. 
Separador de partículas grandes Biosorter (Union Biometrica) [Sala 3]

Separador magnético automático AutoMACS ProSeparator (Miltenyi Biotec) [Sala 1]

 

  • Dos columnas ferromagnéticas.
  • Distintos soportes para la toma y recogida de muestras.

NORMATIVA Con Carácter General

Con carácter general y de acuerdo con las indicaciones del Ministerio de Sanidad, para seguir las pautas de distanciamiento social e higiene se detallan lo siguiente:

COVID19! -> La jornada del personal del servicio será continua en TURNO DE MAÑANA, priorizando el teletrabajo para tareas que no requieran la presencia del técnico (facturación, pedidos, soporte en análisis, etc).

Distinguiremos entre los equipos ubicados en las distintas secciones del Servicio: Sección 1 (Área de citometría analítica), Sección 2 (Área de separación de animales de laboratorio) y Sección 3 (Área de separación celular de muestras humanas, sala NCB2).

  1. Sección 1. Para disfrutar del acceso libre al Área de citometría analítica, y hacer uso de los equipos ubicados en esta sección, es preciso recibir una formación inicial del manejo del equipo concreto que vaya a utilizarse.
  2. Sección 2. El acceso al Área de separación celular de animales de laboratorio es restringido, siendo necesaria la autorización del técnico.
  3. Sección 3. El acceso a la sala NCB2, Área de separación de muestras humanas, es exclusivo para el personal técnico del servicio, siendo únicamente permitido el acceso de otros usuarios cuando no se esté separando ninguna muestra de origen humano.
  4. Está terminantemente prohibido comer, beber o depositar alimentos en la sala de citometría.
  5. El uso de guantes es obligatorio para el manejo de los equipos.
  6. Para usar la centrífuga con muestras de riesgo biológico, deberán usarse tubos con tapón.
  7. COVID19! -> Desinfectar con Etanol 70% la superficie de trabajo, ratón y teclado del ordenador antes y después de usar los equipos.
  8. COVID19! -> En todo momento es obligatorio el uso de guantes para tocar el ratón, teclado y superficie de trabajo.

 

seccion 1. citometría analítica, ACCESO LIBRE: FORTESSA, CANTO II, AUTOMACS, cytoflex, espectral aurora


Estos instrumentos estarán disponibles de forma continuada (24 horas al día, 7 días de la semana) y serán manejados por los propios investigadores, quienes deben conocer el funcionamiento de los mismos.

El técnico del servicio proporcionará la debida formación a los investigadores que soliciten por primera vez el uso de estos aparatos y no estarán capacitados para su uso hasta el VoBo del técnico, que se acreditará mediante EL DESBLOQUEO de la reserva automática con técnico en la Plataforma de Reservas.

  1. COVID19! -> El aforo de esta sala queda restringido a DOS USUARIOS, por lo que los usuarios que utilicen los equipos de esta sala NO PODRÁN BAJAR ACOMPAÑADOS. El aforo puede ascender momentáneamente a CUATRO PERSONAS, contando con el técnico del servicio que pueda personarse puntualmente para la solución de alguna avería, debiendo el usuario respetar la distancia social de 2m.
  2. COVID19! -> La formación de uso y manejo de los citómetros analizadores se dará de forma telemática, donde el usuario que requiera recibir la formación deberá estar presente en el citómetro correspondiente, previa reserva autorizada en la Plataforma de Reservas del IBiS.
  3. COVID19! -> El soporte para la adquisición de muestras será telemático siempre que sea posible.
  4. COVID19! -> En ningún caso podrá darse el curso a más de una persona cada vez, ya que es imposible guardar la distancia de seguridad de 2m.
  5. La puesta en marcha del citómetro al inicio de cada jornada (incluidas calibraciones y lavados pertinentes) correrán a cargo del técnico del servicio, quedando así disponibles para su uso.
  6. Es obligación del investigador, dejar el equipo limpio y preparado para el siguiente usuario. El cierre y limpieza del aparato será responsabilidad del ÚLTIMO USUARIO REGISTRADO EN LA PLATAFORMA DE RESERVAS, independientemente de que éste haya usado el aparato o no.
  7. El usuario que por cualquier razón llegue tarde a su reserva, podrá iniciar su experimento siempre y cuando ello no suponga el retraso de la reserva siguiente. Se concederá un máximo de 15 min a los investigadores que no hayan podido finalizar el experimento antes de la siguiente reserva. En ese tiempo se procederá a la limpieza del equipo. Si se sobrepasa este tiempo, se tendrá que ceder el lugar al investigador siguiente, pudiendo finalizar su experimento al final del día si existen huecos libres, o con una reserva para el día siguiente.
  8. Las reservas se harán con un máximo de una semana de antelación y con un mínimo de una hora.
  9. Los cambios y cancelaciones en las reservas para el mismo día serán aceptadas siempre y cuando estén justificadas y se modifiquen con un tiempo mínimo de una hora de antelación. Los cambios y cancelaciones producidos en el mismo día que afecten a la primera reserva del día o que no sean ejecutadas con una antelación mínima de 1h, se tendrán en cuenta para la facturación.

SECCION 2. ÁREA de separación celular de animales de laboratorio, acceso restringido: MICROSCOPIO INVERTIDO DE FLUORESCENCIA CKX41, SEPARADOR CELULAR moflo astrios, FACS JAZZ


COVID19! -> Todos los equipos de esta sala quedan restringidos al uso exclusivo del técnico del servicio.
El mantenimiento y limpieza de los separadores celulares es responsabilidad del técnico.

Los separadores celulares serán manejados únicamente por el personal técnico del servicio, por tanto, su horario de uso queda restringido al horario del personal.

Para datos concretos sobre la muestra que se consideren útiles para la separación, consultar con el técnico del servicio.

Hay que considerar que dada la configuración óptica del equipo y las particularidades de cada experimento (tamaño del “nozzle”, presión de salida, velocidad del flujo, cálculo del “drop delay”, etc.), éste debe ser reajustado después de cada uso, por lo que es óptimo dejar libre un período de 30 minutos entre una reserva y la siguiente. Este tiempo de espera no siempre es necesario, por lo que de rutina los usuarios no están obligados a cumplirlo, salvo en casos en los que el técnico precise de ello.
  1. La reserva mínima es de media hora. Se reservará con una semana como máximo de antelación y como mínimo de un día.
  2. COVID19! -> Podrán anularse reservas hasta el día anterior a la separación, nunca el mismo día.
  3. El apagado del separador implica una limpieza exhaustiva del mismo para garantizar las óptimas condiciones de separación, por ello, 30min antes del apagado de equipo dejará de pasarse muestra.
  4. COVID19! -> No se podrá acceder a la sala de separación celular. Para dejar las muestras se habilitará una zona en la sala de los citómetros analizadores próxima a la centrífuga donde depositar todo lo necesario para la separación.

SECCIÓN 3. ÁREA DE SEPARACIÓN CELULAR DE MUESTRAS HUMANAS, ACCESO LIMITADO AL PERSONAL TÉCNICO DEL SERVICIO: SEPARADOR CELULAR FACS ARIA FUSION, SEPARADOR DE PARTÍCULAS GRANDES BIOSORTER


COVID19! -> Todos los equipos de esta sala quedan restringidos al uso exclusivo del técnico del servicio.

El mantenimiento y limpieza de los separadores celulares es responsabilidad del técnico.

Los separadores celulares serán manejados únicamente por el personal técnico del servicio, por tanto, su horario de uso queda restringido al horario del personal.

Para datos concretos sobre la muestra que se consideren útiles para la separación, consultar con el técnico del servicio.

El procedimiento normalizado de trabajo para esta sección está detallado en un documento a parte: PNT:Separación de muestras humanas de riesgo biológico.

 

Normativa Administrativa


Los programas de análisis se instalan en los ordenadores de los usuarios (para solicitar la instalación contactar con el técnico de informática). Todos precisan de una licencia para ejecutar el programa. Existen 8 licencias para el software DIVA v8.0 y 6 para el software FlowJo v10.2. Estas licencias se solicitarán al técnico del servicio y el préstamo será de una semana.

El período de préstamo contará a partir del día de entrega, éste incluido, e independientemente de la hora de la entrega. La devolución deberá realizarse antes de las 12h del mediodía del séptimo día. La superación del tiempo de préstamo supondrá una penalización.

La facturación del servicio se aplicará en base a las últimas tarifas publicadas y aprobadas en Consejo Rector.

La facturación se llevará a cabo trimestralmente, salvo indicaciones específicas de la Gerencia del IBiS.

Se enviará por correo electrónico una copia del albarán emitido a cada IR responsable de aquellos grupos que usen las instalaciones del servicio. Este correo electrónico debe ser devuelto al técnico del servicio con su conformidad o, en caso contrario, con las dudas que le presente la facturación.

La eficacia del software de adquisición empeora con la acumulación de datos. Por ello, cada vez que se haga uso de un equipo de citometría, se deben exportar los datos al servidor del edificio tal y como indica el servicio de informática del centro.

No obstante, la eliminación de los datos almacenados en los equipos de citometría se realizará periódica y sistemáticamente por el técnico del servicio y, en función de la saturación de los equipos, se realizará una o dos veces al año.

Esta eliminación de datos será avisada con antelación y repetitividad mediante correo electrónico y mediante la reserva correspondiente del equipo por parte del técnico del servicio.

 

A continuación puede descargar las tarifas aplicables.

Para solicitar información al respecto puede dirigirse a la siguiente dirección de correo electrónico: majocastro@us.es.