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Citometría de Flujo y Separación Celular

  1. Presentación
  2. Técnicas
  3. Equipamiento
  4. Normas de uso
  5. Tarifas
Citometría de Flujo y Separación Celular

El Servicio de Citometría de Flujo y Separación Celular es una unidad especializada en técnicas de análisis celular y tiene como objetivo proveer a los investigadores del IBiS de la última tecnología en citometría de flujo, que sirva de soporte para continuar la investigación biomédica que se lleva a cabo.

Ubicación:1ª planta

Horario:L-V: De 9:00 a 17:00 *

(*) Aquellos experimentos que requieran tiempo fuera del horario establecido se podrán realizar previo conocimiento del técnico responsable.

Las técnicas que ofrece este servicio son muy numerosas. El uso más común es analizar los diferentes fenotipos celulares presentes en una población compleja usando como criterio de distinción la expresión diferencial de proteínas.

Entre las opciones que se ofrecen destacamos algunas:

  • Inmunofenotipaje celular.
  • Análisis de ciclo celular, proliferación y apoptosis.
  • Separación de poblaciones celulares mediante citometría de flujo (cell sorting).
  • Análisis multiplexado.
  • Análisis de micropartículas.
  • Análisis SP.
  • Análisis de ROS.
  • Cinéticas.
  • Desarrollo de nuevas técnicas en citometría de flujo para la medición de otros parámetros, como nucleares, citoplasmáticos, de superficie y extracelulares.
Pulse sobre los distintos equipos para conocer en detalle sus características.

Citómetro analizador Canto II (Becton Dickinson)

 

  • Láseres:
    • Violeta. 405 nm 30mW. Dos detectores.
    • Azul: 488nm 20mW. Cinco detectores (más FSC).
    • Rojo: 640 nm 17 mW. Dos detectores
  • Módulo de adquisición en placa HTS (96p, 384p).  

 

PARA VER LA CONFIGURACIÓN ÓPTICA DE ESTE EQUIPO, POR FAVOR, CONSULTE LA NORMATIVA.

Citómetro analizador Canto II (Becton Dickinson)

Citómetro analizador LRS II Fortessa (Becton Dickinson)

 

  • Láseres:
    • Violeta: 405 nm 50mW. Siete detectores.
    • Azul: 488nm 50mW. Tres detectores (más FSC).
    • Rojo: 640 nm 40 mW. Tres detectores.
    • Verde: 561nm 50mW. Cinco detectores.
  • Módulo de adquisición en placa HTS (96p, 384p).  

 

PARA VER LA CONFIGURACIÓN ÓPTICA DE ESTE EQUIPO, POR FAVOR, CONSULTE LA NORMATIVA.

Citómetro analizador LRS II Fortessa (Becton Dickinson)

Separador celular BD FacsJazz (Becton Dickinson)

 

  • Jet-in-air con boquilla de 100um.
  • Láseres:
    • Azul (488nm, 80mW).  3 detectores (más FSC).
    • Verde (561nm, 50mW). 4 detectores.

 

PARA VER LA CONFIGURACIÓN ÓPTICA DE ESTE EQUIPO, POR FAVOR, CONSULTE LA NORMATIVA.

Separador celular BD FacsJazz (Becton Dickinson)

Separador celular Facs Aria Fusion (Becton Dickinson)

 

  • Configuración óptica (todos los láseres refrigerados por aire):
    • Láser Ultravioleta. 355nm, 15mW. Dos detectores colineales con el láser violeta.
    • Láser Violeta. 405nm, 85mW.  6 detectores.
    • Láser Azul: 488nm, 50mW. Tres detectores (más FSC).
    • Láser Rojo: 633 nm; 100 mW. Tres detectores.
    • Láser Verde. 561 nm, 50mW.  Cinco detectores.
  • Admite varios soportes tanto para la toma de muestra como para la recogida (portaobjetos, placas multipocillos, etc.)
  •  Sistema de control de temperatura para la adquisición y recogida de muestras.
  •  Separación multiparamétrica de hasta cuatro poblaciones simultáneamente.
  •  Campana de flujo laminar de Clase II para separaciones en esterilidad.
  •  Sistema de Index sorting, que permite localizar las células separadas dentro del análisis, mejorando así las separaciones posteriores (disponible sólo para la separación en placa).

 

PARA VER LA CONFIGURACIÓN ÓPTICA DE ESTE EQUIPO, POR FAVOR, CONSULTE LA NORMATIVA.

Separador celular Facs Aria Fusion (Becton Dickinson)

Separador magnético automático AutoMACS ProSeparator (Miltenyi Biotec)

 

  • Dos columnas ferromagnéticas.
  • Distintos soportes para la toma y recogida de muestras.
Separador magnético automático AutoMACS ProSeparator (Miltenyi Biotec)

Con Carácter General.

Para que los aparatos estén siempre en perfecto estado y consecuentemente el servicio tenga un buen funcionamiento, es imprescindible respetar unas normas de uso, por lo que aquí se describen las pautas a seguir por todos los usuarios del servicio.

Para poder realizar reservas online de los equipos del Servicio de Citometría de Flujo y Separación Celular del IBiS, es necesario que el usuario esté dado de alta en el sistema de reservas online.

Distinguiremos entre los equipos ubicados en la primera sala (de uso independiente) y aquellos que se encuentran en la segunda sala y, por tanto, su uso depende del técnico del servicio.

También es posible disponer del técnico del servicio para la realización de experimentos, siempre y cuando se cumplan los siguientes requisitos:

  • Realicen una solicitud previa al servicio mediante la cumplimentación del Anexo II (VER NORMATIVA COMPLETA).
  • El técnico del servicio se limitará a la realización de protocolos de marcaje celular, el uso del citómetro correspondiente y el análisis de las muestras. En ningún caso podrá dedicarse a la obtención de muestra (ya sea mediante extracciones de tejidos o manipulación de líneas celulares) ni a la disgregación de la misma.

A continuación, se detallan algunas normas básicas higiénico-sanitarias que deben cumplirse:

  • El acceso al servicio es restringido. No es así para la sala de analizadores, pero en ningún caso se podrá acceder a la sala del separador celular sin la autorización del técnico.
  • Está terminantemente prohibido comer, beber, maquillarse o depositar alimentos en la sala de citometría.
  • El uso de guantes es obligatorio.
  • Para usar la centrífuga con muestras de riesgo biológico, deberán usarse tubos con tapa.

Equipos de la Primera Sala (Uso Independiente): FC500, FORTESSA, AUTOMACS.

  • Estos instrumentos serán manejados por los propios investigadores, quienes deben conocer el funcionamiento de los mismos. El técnico del servicio proporcionará la debida formación a los investigadores que soliciten por primera vez el uso de estos aparatos y no estarán capacitados para su uso hasta el VºBº del técnico.
  • La puesta en marcha del citómetro al inicio de cada jornada (incluidos calibraciones y lavados pertinentes) correrán a cargo del técnico del servicio, quedando así disponibles para su uso.
  • Es obligación del investigador, dejar el equipo limpio y preparado para el siguiente usuario. El cierre y limpieza del aparato será responsabilidad del ÚLTIMO USUARIO REGISTRADO EN EL CALENDARIO, independientemente de que éste haya usado el aparato o no.
  • El usuario que por cualquier razón llegue tarde a su reserva, podrá iniciar su experimento siempre y cuando ello no suponga el retraso de la reserva siguiente.
  • Se concederá un máximo de 15 min a los investigadores que no hayan podido finalizar el experimento antes de la siguiente reserva. Si se sobrepasa este tiempo, automáticamente tendrá que ceder el lugar al investigador siguiente, pudiendo finalizar su experimento al final del día si existen huecos libres, o en caso contrario tendrá que hacer una nueva reserva para el día siguiente.
  • La reposición de las soluciones será responsabilidad del técnico. Cuando se vayan acabando es conveniente avisar para que puedan ser repuestas o pedidas.
  • Los cambios y cancelaciones en las reservas para el mismo día no serán aceptadas cuando supongan un gasto innecesario para el servicio. Ejemplo: En la eliminación de una reserva al inicio de la jornada con menos de una hora de antelación, el citómetro ya estaría encendido y ningún investigador podría reemplazar el hueco debido al carácter repentino de la acción.
  • En base a la regla 7, los cambios y cancelaciones producidos en el mismo día que afecten a la primera reserva del día o que no sean ejecutadas con una antelación mínima de 1h, se tendrán en cuenta para la facturación.
  • Para el uso del ordenador para análisis de datos, previa solicitud al técnico del servicio, es necesario realizar una reserva en el calendario correspondiente; ésta siempre será al finalizar la jornada del técnico del servicio.
  • Los software de análisis pueden instalarse en los ordenadores de los usuarios (para solicitar la instalación contactar con el técnico de informática). Algunos de ellos precisan de una licencia para ejecutar el programa. Existen 4 licencias para el software DIVA v6.0 y dos para el software FlowJo v7.9. Estas licencias se solicitarán al técnico del servicio y el préstamo será de dos días laborables. El período de préstamo contará a partir del día de entrega, éste incluido, e independientemente de la hora de la entrega. La devolución deberá realizarse antes de las 12h del mediodía del tercer día. La superación del tiempo de préstamo supondrá una penalización de dos días por día de retraso.

Equipos de Segunda Sala (Uso por parte del Técnico del Servicio): MOFLO HIGH SPEED SORTER, MICROSCOPIO INVERTIDO DE FLUORESCENCIA CKX41.

  • El separador celular será manejado únicamente por el técnico del servicio, por tanto su horario de uso queda restringido al horario del personal.
  • El microscopio invertido de fluorescencia queda restringido al uso exclusivo del separador celular; es decir, técnico y aquellos usuarios que precisen del mismo para llevar a cabo la separación celular.
  • El mantenimiento y limpieza del separador celular es responsabilidad del técnico
  • En las reservas de este equipo, serán consideradas como un servicio, por lo que éstas quedarán validadas una vez las acepte el operador. El incumplimiento del horario para este equipo supondrá la no realización del experimento.
  • Hay que tener en cuenta que dada la configuración óptica del equipo y las particularidades de cada experimento (tamaño del “nozzle”, presión de salida, velocidad del flujo, cálculo del “drop delay”, etc.), éste debe ser reajustado después de cada uso, por lo que es óptimo dejar libre un período de 30 minutos entre una reserva y la siguiente. Este tiempo de espera no siempre es necesario, por lo que de rutina los usuarios no están obligados a cumplirlo, salvo en casos en los que el técnico precise de ello.

Normativa Administrativa.

  • La facturación del servicio se aplicará en base a las últimas tarifas publicadas y aprobadas en Consejo Rector.
  • La facturación se llevará a cabo trimestralmente, salvo indicaciones específicas de la Gerencia del IBiS.
  • Se enviará por correo electrónico una copia del albarán emitido a cada IR responsable de aquellos grupos que usen las instalaciones del servicio. Este correo electrónico debe ser devuelto al técnico del servicio con su conformidad o, en caso contrario, con las dudas que le presente la facturación.
  • La eficacia de los software de adquisición empeora con la acumulación de datos. Por ello, cada vez que se haga uso de un equipo de citometría, se deben exportar los datos al servidor del edificio tal y como indica el servicio de informática del centro.
  • No obstante, la eliminación de los datos almacenados en los equipos de citometría se realizará periódica y sistemáticamente por el técnico del servicio y, en función de la saturación de los equipos, se realizará una o dos veces al año.
  • Esta eliminación de datos será avisada con antelación y repetitividad mediante correo electrónico.

Para solicitar información al respecto puede dirigirse a la siguiente dirección de correo electrónico: majocastro@us.es.