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Citometría de Flujo y Separación Celular

  1. Presentación
  2. Técnicas
  3. Equipamiento
  4. Normas de uso
  5. Tarifas
Citometría de Flujo y Separación Celular

El Servicio de Citometría de Flujo y Separación Celular es una unidad especializada en técnicas de análisis celular y tiene como objetivo proveer a los investigadores del IBiS de la última tecnología en citometría de flujo, que sirva de soporte para continuar la investigación biomédica que se lleva a cabo.

Ubicación:1ª planta

Horario:L-V: De 9:00 a 17:00 *

(*) Aquellos experimentos que requieran tiempo fuera del horario establecido se podrán realizar previo conocimiento del técnico responsable.

Las técnicas que ofrece este servicio son muy numerosas. El uso más común es analizar los diferentes fenotipos celulares presentes en una población compleja usando como criterio de distinción la expresión diferencial de proteínas.

Entre las opciones que se ofrecen destacamos algunas:

  • Inmunofenotipaje celular.
  • Análisis de ciclo celular, proliferación y apoptosis.
  • Separación de poblaciones celulares mediante citometría de flujo (cell sorting).
  • Análisis multiplexado.
  • Análisis de micropartículas.
  • Análisis SP.
  • Análisis de ROS.
  • Cinéticas.
  • Desarrollo de nuevas técnicas en citometría de flujo para la medición de otros parámetros, como nucleares, citoplasmáticos, de superficie y extracelulares.
Pulse sobre los distintos equipos para conocer en detalle sus características.

Citómetro analizador Canto II (Becton Dickinson)

 

  • Láseres:
    • Violeta. 405 nm 30mW. Dos detectores.
    • Azul: 488nm 20mW. Cinco detectores (más FSC).
    • Rojo: 640 nm 17 mW. Dos detectores
  • Módulo de adquisición en placa HTS (96p, 384p).  

 

PARA VER LA CONFIGURACIÓN ÓPTICA DE ESTE EQUIPO, POR FAVOR, CONSULTE LA NORMATIVA.

Citómetro analizador LRS II Fortessa (Becton Dickinson)

 

  • Láseres:
    • Violeta: 405 nm 50mW. Siete detectores.
    • Azul: 488nm 50mW. Tres detectores (más FSC).
    • Rojo: 640 nm 40 mW. Tres detectores.
    • Verde: 561nm 50mW. Cinco detectores.
  • Módulo de adquisición en placa HTS (96p, 384p).  

 

PARA VER LA CONFIGURACIÓN ÓPTICA DE ESTE EQUIPO, POR FAVOR, CONSULTE LA NORMATIVA.

Separador celular BD FacsJazz (Becton Dickinson)

 

  • Jet-in-air con boquilla de 100um.
  • Láseres:
    • Azul (488nm, 80mW).  3 detectores (más FSC).
    • Verde (561nm, 50mW). 4 detectores.

 

PARA VER LA CONFIGURACIÓN ÓPTICA DE ESTE EQUIPO, POR FAVOR, CONSULTE LA NORMATIVA.

Separador celular Facs Aria Fusion (Becton Dickinson)

 

  • Configuración óptica (todos los láseres refrigerados por aire):
    • Láser Ultravioleta. 355nm, 15mW. Dos detectores colineales con el láser violeta.
    • Láser Violeta. 405nm, 85mW.  6 detectores.
    • Láser Azul: 488nm, 50mW. Tres detectores (más FSC).
    • Láser Rojo: 633 nm; 100 mW. Tres detectores.
    • Láser Verde. 561 nm, 50mW.  Cinco detectores.
  • Admite varios soportes tanto para la toma de muestra como para la recogida (portaobjetos, placas multipocillos, etc.)
  •  Sistema de control de temperatura para la adquisición y recogida de muestras.
  •  Separación multiparamétrica de hasta cuatro poblaciones simultáneamente.
  •  Campana de flujo laminar de Clase II para separaciones en esterilidad.
  •  Sistema de Index sorting, que permite localizar las células separadas dentro del análisis, mejorando así las separaciones posteriores (disponible sólo para la separación en placa).

 

PARA VER LA CONFIGURACIÓN ÓPTICA DE ESTE EQUIPO, POR FAVOR, CONSULTE LA NORMATIVA.

Separador de partículas grandes Biosorter (Union Biometrica)

El BioSorter® es un sistema de flujo continuo capaz de analizar y separar muestras que varían en tamaño de 10 a 1.500 μm, dependiendo del Fluidic and Optics Core Assemblies (FOCA).

FOCA disponible: 1.000 µm

Separador de partículas grandes Biosorter (Union Biometrica)

Separador magnético automático AutoMACS ProSeparator (Miltenyi Biotec)

 

  • Dos columnas ferromagnéticas.
  • Distintos soportes para la toma y recogida de muestras.

NORMATIVA Con Carácter General.

  • Para reservar equipos del Servicio de Citometría del IBiS, es necesario el registro en la Plataforma de reservas del IBiS https://servicios.ibis-sevilla.es/.
  • Los equipos ubicados en la primera sala son de acceso libre y aquellos que se encuentran en la segunda sala tienen el uso restringido.
  • Para disfrutar del acceso libre a los equipos ubicados en la primera sala del Servicio de Citometría, es preciso recibir una formación inicial del uso del equipo concreto. 
  • El acceso a la sala de separadores celulares es restringido siendo necesaria la autorización del técnico.
  • Está terminantemente prohibido comer, beber o depositar alimentos en la sala de citometría.
  • El uso de guantes es obligatorio para el manejo de los equipos.
  • Para usar la centrífuga con muestras de riesgo biológico, deberán usarse tubos con tapa.

Equipos de ACCESO LIBRE: FORTESSA, CANTO II y AUTOMACS.

  • Estos instrumentos serán manejados por los propios investigadores, quienes deben conocer el funcionamiento de los mismos. El técnico del servicio proporcionará la debida formación a los investigadores que soliciten por primera vez el uso de estos aparatos y no estarán capacitados para su uso hasta el VºBº del técnico, que se acreditará mediante EL DESBLOQUEO de la reserva automática con técnico en la plataforma de reservas.
  • La puesta en marcha del citómetro al inicio de cada jornada (incluido calibraciones y lavados pertinentes) correrán a cargo del técnico del servicio, quedando así disponibles para su uso.
  • Es obligación del investigador, dejar el equipo limpio y preparado para el siguiente usuario. El cierre y limpieza del aparato será responsabilidad del ÚLTIMO USUARIO REGISTRADO EN EL CALENDARIO, independientemente de que éste haya usado el aparato o no.
  • No hay hora límite para pasar muestras por estos citómetros.
  • El usuario que por cualquier razón llegue tarde a su reserva, podrá iniciar su experimento siempre y cuando ello no suponga el retraso de la reserva siguiente.
  • Se concederá un máximo de 15 min a los investigadores que no hayan podido finalizar el experimento antes de la siguiente reserva. En ese tiempo se procederá a la limpieza del equipo. Si se sobrepasa este tiempo, se tendrá que ceder el lugar al investigador siguiente, pudiendo finalizar su experimento al final del día si existen huecos libres, o con una reserva para el día siguiente.
  • Las reservas se harán con un máximo de una semana de antelación y con un mínimo de una hora.
  • Los cambios y cancelaciones en las reservas para el mismo día serán aceptadas siempre y cuando estén justificadas y se modifiquen con un tiempo mínimo de una hora de antelación.
  • Los softwares de análisis se instalan en los ordenadores de los usuarios (para solicitar la instalación contactar con el técnico de informática). Todos precisan de una licencia para ejecutar el programa. Existen 8 licencias para el software DIVA v8.0 y 4 para el software FlowJo v10.2. Estas licencias se solicitarán al técnico del servicio y el préstamo será de una semana.

Equipos de acceso restringido: MICROSCOPIO INVERTIDO DE FLUORESCENCIA CKX41, SEPARADOR CELULAR FACS ARIA FUSION, FACS JAZZ Y BIOSORTER.

  • Los separadores celulares serán manejados únicamente por el técnico del servicio, por tanto su horario de uso queda restringido al horario del personal.
  • El microscopio invertido de fluorescencia queda restringido al uso exclusivo del separador celular; es decir, técnico y aquellos usuarios que precisen del mismo para llevar a cabo la separación celular.
  • El mantenimiento y limpieza del separador celular es responsabilidad del técnico.
  • Para datos concretos sobre la muestra que se consideren útiles para la separación, consultar con el técnico del servicio.
  • Hay que tener en cuenta que dada la configuración óptica del equipo y las particularidades de cada experimento (tamaño del “nozzle”, presión de salida, velocidad del flujo, cálculo del “drop delay”, etc.), éste debe ser reajustado después de cada uso, por lo que es óptimo dejar libre un período de 30 minutos entre una reserva y la siguiente. Este tiempo de espera no siempre es necesario, por lo que de rutina los usuarios no están obligados a cumplirlo, salvo en casos en los que el técnico precise de ello.
  • La reserva mínima es de media hora. Se reservará con una semana como máximo de antelación y como mínimo de un día.
  • Una vez realizada la reserva, se aceptarán anulaciones de las mismas el día anterior a la separación, nunca en el mismo día, salvo excepciones justificadas y discutidas con el técnico del servicio. En cualquier caso, una cancelación en el mismo día imputará para la facturación si ha implicado el encendido del equipo.
  • El apagado del separador implica una limpieza exhaustiva del mismo para garantizar las óptimas condiciones de separación, por ello, 30min antes del apagado de equipo dejará de pasarse muestra.

Normativa Administrativa.

  • La facturación del servicio se aplicará en base a las últimas tarifas publicadas y aprobadas en Consejo Rector.
  • La facturación se llevará a cabo trimestralmente, salvo indicaciones específicas de la Gerencia del IBiS.
  • Se enviará por correo electrónico una copia del albarán emitido a cada IR responsable de aquellos grupos que usen las instalaciones del servicio. Este correo electrónico debe ser devuelto al técnico del servicio con su conformidad o, en caso contrario, con las dudas que le presente la facturación.
  • La eficacia del software de adquisición empeora con la acumulación de datos. Por ello, cada vez que se haga uso de un equipo de citometría, se deben exportar los datos al servidor del edificio tal y como indica el servicio de informática del centro.
  • No obstante, la eliminación de los datos almacenados en los equipos de citometría se realizará periódica y sistemáticamente por el técnico del servicio y, en función de la saturación de los equipos, se realizará una o dos veces al año.
  • Esta eliminación de datos será avisada con antelación y repetitividad mediante correo electrónico y mediante la reserva correspondiente del equipo por parte del técnico del servicio.

Para solicitar información al respecto puede dirigirse a la siguiente dirección de correo electrónico: majocastro@us.es.